Les contaminations keratine

Afin de maximiser les chances de succès des analyses de protéines  en spectrométrie de masse, il est vivement conseillé de préparer les échantillons selon les recommandations ci-dessous.

Vous : Les kératines viennent de la peau, des cheveux et des vêtements.

• Le port de la blouse et de gants propres est indispensable tout au long de la manipulation.
• Les gants doivent être renouvelés à chaque manipulation.
• Eviter le port de pulls en laine, mohair…

Le matériel : Les kératines proviennent des poussières en suspension.

• Le matériel et la vaisselle entrant en contact avec le gel doivent être lavés avec un détergent, rincés à l’eau ultrapure et séchés à l’éthanol.
• Tout le matériel doit être rangé à l’abri de la poussière.
• Dans la mesure du possible, manipuler sous une hotte à flux laminaire.

Les solutions : Les solutions elles-mêmes peuvent être source de kératines.

• Utiliser de préférence des microtubes de 1.5 ml en polypropylène transparent.
• Utiliser des produits neufs qui seront exclusivement consacrés aux gels.
• Les cones seront réservés à un usage protéomique. Porter des gants!
• Utiliser de préférence des boites de cônes pré-remplies pour éviter toute manipulation des embouts de pipette.

Le gel : Avoir un maximum de protéine dans un minimum d’acrylamide.

• Utiliser si possible des gels de faible épaisseur (0.75mm).
• Pour les gels 1D, charger les puits vides avec du tampon Laemmli pour limiter la diffusion des protéines sur les cotés lors de la migration.
• Conservation du gel dans 1% acide acétique à 4°C.
• Préférer la coloration au bleu de Coomassie à celle au nitrate d’argent.
• En cas de coloration au nitrate d’argent, traiter les échantillons au plus vite.